蜂毒肽应用领域
蜂毒肽具有多种生物学、药理学和毒理学作用,包括对细胞膜的强表面活性作用,内蒙古蜂毒、溶血、***以及潜在的抗**作用。蜂毒肽可以穿过磷脂双分子层形成孔洞,利用这种生物活性可以研究生物膜与蛋白质之间的相互作用。在发现蜂***对磷脂酶A2(PLA2)活性的增强作用后,内蒙古蜂毒,蜂***也被用作磷脂酶A2(PLA2)的活化剂。蜂毒肽还是一种独特的致痛物质,它影响着躯体感觉系统的神经元可塑性。
蜂毒肽是迄今为止人类所知的***活性**强的物质之一,其***活性是氢化可的松的100倍,可以***20多种革兰氏阴性和阳性细菌的生长繁殖,内蒙古蜂毒, 蜂毒 肽由26个氨基酸组成,是不对称的线性多肽。内蒙古蜂毒
王秋波等通过人工合成含特异性酶切位点的AB两条寡核苦酸片段,在Klenow酶作用下形成目的基因,用限制型内切酶HindⅢ,XmnⅠ同时酶切目的基因和表达载体Pmal-p2质粒,在T4连接酶的作用下构建两者的重组体,通过α-互补筛选出附性克隆,并通过特异性酶切和测序分析进行鉴定,获得重组蜂毒肽的原核表达克隆。
2003年,刘岭等通过MTT法对SMMC-7721、BEL-7402和Hep-3B三种肝*细胞系进行研究,考察蜂毒肽*****的量效关系,结果显示:在8~64μg/mL剂量时,蜂毒肽的抑瘤率直线上升,在体外表现***的抗瘤效果。 内蒙古蜂毒组织胺可以影响许多细胞的反应如过敏反应、发炎反应、胃酸分泌等。
蜂毒是蜜蜂科昆虫中华蜜蜂、意大利蜜蜂等工蜂尾部毒性分泌的毒液,同时也是蜜蜂自卫的“化学武器”,当蜂群受到威胁时蜜蜂便会群起而攻之,在生产中养蜂人常用电刺激的方法获取蜂毒,简单来说就是用直流电刺激蜜蜂进行蛰刺排毒,然后再将蜜蜂排除的毒液收集起来便可得到较为纯净的蜂毒。
二、参考价格
蜂毒的价格极为昂贵(在所有蜂产品中都是**贵的),蜂毒干粉大约在300~400元1克,而精制蜂毒的价格基本上在1200元以上1克,为什么蜂毒这么贵呢?主要原因是蜂毒的提取极为不易且蜜蜂的排毒量非常低(1只工蜂排毒量大约为0.15~0.3毫克左右,也就是说大约需要7000只蜜蜂才能生产出1克蜂毒)。
蜂毒肽制备方法
目前获取蜂毒肽的方法有3种,化学合成、从粗蜂毒中分离纯化和生物工程法。利用化学合成的方法可以获得具有生物活性的蜂毒肽纯品,但其成本太高,并不适合蜂毒肽的生产,实际应用较少。目前,获取蜂毒肽纯品的主要途径是从粗蜂毒中分离纯化。分离纯化方法以色谱理论为基础,随着色谱技术的发展以及与其他提取工艺的结合,操作成本逐渐降低,产量和纯度有所提高。利用生物工程技术可以诱导蜂毒肽基因在工程菌中表达,然后收集纯化表达蛋白,从而得到蜂毒肽纯品。由于蜂毒肽有破坏细胞膜以及致死细胞毒性,其在工程菌中的直接表达无法实现。面对这个问题,科学家们找到了在工程菌中表达蜂毒肽融合蛋白的方法,并在融合蛋白的选择及后期分离纯化上进行了大量研究,取得较大进展。 蜂毒中富含的蜂毒肽也能破坏红细胞膜的通透性。
1972年,Habermant报道1μmol/L的蜂毒肽就能阻止**细胞增殖但却不***正常细胞的生长与克隆率。
1983年,Vlasak等用mRNA-DNA逆转录的方法,利用质粒pBR322构建了蜂王毒腺的cDNA文库,用蜂王毒腺总mRNA制作探针从此文库中分离得到了蜂毒肽的cDNA,再进一步将其克隆到质粒pUC18上进行DNA序列分析,由DNA的序列分析结果推测出的蜂毒肽序列与实际测得的完全相同。
1996年,Arora通过对正常大鼠肝细胞与大鼠肝*细胞抗缺氧损伤能力的实验对比,证实蜂毒肽***磷脂酶A2(PLA2)能够解除肝*细胞对缺氧的抵抗。DUnn等将来自于鼠抗人骨髓瘤细胞和淋巴瘤细胞表面特异蛋白的抗体SCFV基因同蜂毒肽基因相融合,构建了能杀**细胞的抗***基因,大肠杆菌中融合基因并表达,精制的抗***显示了体外杀死**细胞的效能。 Kindas等从处女蜂王的毒腺中提取得到了总mRNA,发现蜂毒肽mRNA含大约400个碱基对和1个短的polyA尾。 Haase实验表明蜂毒肽可以***细胞脂酶,包括磷脂酶C(PLC)、磷脂酶D(PLD)、磷脂酶A2(PLA2)及甘油三酯酶等。 ,还有透明质酸酶、蜂毒磷脂酶 及组胺等多种活性物 质,故有肽类“宝库”之称。内蒙古蜂毒
国外已有蜂***、蜂散痛、蜂特灵等多种蜂毒制剂。内蒙古蜂毒
蜂毒肽的分子生物学机制
至今为止,对于蜂***的***及溶血机理仍然很不确定,以往研究认为,抗细菌素类是通过穿孔模型形成膜空洞机制引起***的。但深入研究发现,有些抗细菌素与细胞膜的作用方式与穿孔模型有明显
不同,后来便提出了一种新的作用模式--地毯模式。目前,抗细菌素侵膜机理占主导地位的观点仍然是穿孔模型和地毯模式机理。根据蜂***的这种侵膜机制,赵亚华等通过实验有目的地改造了蜂***的氨基酸的一级结构序列以及所要表达的蜂***基因。尽量使蜂***在与细菌细脑膜相互作用时,主要采取地毯模式侵膜而引起***,同时,由于带电荷数与分子构象的改变,**降低了它与血细胞膜两亲性作用的几率,从而达到***溶血性的目的。改造后的蜂***的溶血性与标准样品的溶血活性相比,有较大幅度降低,大约降低了14.3 倍。 内蒙古蜂毒
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